1.OverNightで培養した菌の1.5mlをエッペンで遠心(15,000rpm×3min)。
2.0ml テリフィック培地で培養するといいかも。
遠心後、エッペンをペーパータオルにひっくり返して上澄みを捨てる。
2.沈殿をGTE 100μlでVortex。氷中に置く。
3.作りたてのアルカリSDS溶液200μlを加え上下にゆっくりひっくり返す。
激しく攪拌するとゲノムDNAが出てしまう。
4.氷中に5min置く
正確に5分間置くこと!!
5.7.5M NH4Ac 150μlで中和しVortex。
6.4℃15,000rpm×10minで遠心。上澄みを新しいエッペンに移す。
新しいエッペンを用意しマジックで印などをつけておく。
7.isopropanol 300μlを加える。
飽和溶液にするため3層に分かれている場合は1番上を使う。
8.常温で10分待つ。
待ってる間に遠心機の温度を調節しておく。
9.常温15,000rpm×10minで遠心。上澄みを捨てる。
10.冷80%エタノール1000μlを加え軽く攪拌。
11.4℃15,000rpm×10minで遠心。上澄みを捨てる。
ピペットで捨てる。
12.遠心エバポレータで乾燥。
15~30分まわせば乾く。
13.TE 50μlを混合。
プラスミドの挿入テストや形質転換に使う。
大事なことはSDSを入れてから中和するまで。この間に激しい操作を行なったり、温度を上げたりしないこと。そうすればOk。
2.0ml テリフィック培地で培養するといいかも。
遠心後、エッペンをペーパータオルにひっくり返して上澄みを捨てる。
2.沈殿をGTE 100μlでVortex。氷中に置く。
3.作りたてのアルカリSDS溶液200μlを加え上下にゆっくりひっくり返す。
激しく攪拌するとゲノムDNAが出てしまう。
4.氷中に5min置く
正確に5分間置くこと!!
5.7.5M NH4Ac 150μlで中和しVortex。
6.4℃15,000rpm×10minで遠心。上澄みを新しいエッペンに移す。
新しいエッペンを用意しマジックで印などをつけておく。
7.isopropanol 300μlを加える。
飽和溶液にするため3層に分かれている場合は1番上を使う。
8.常温で10分待つ。
待ってる間に遠心機の温度を調節しておく。
9.常温15,000rpm×10minで遠心。上澄みを捨てる。
10.冷80%エタノール1000μlを加え軽く攪拌。
11.4℃15,000rpm×10minで遠心。上澄みを捨てる。
ピペットで捨てる。
12.遠心エバポレータで乾燥。
15~30分まわせば乾く。
13.TE 50μlを混合。
プラスミドの挿入テストや形質転換に使う。
【GTE溶液】 1M Tris HCl(pH7.6) 2.5ml 0.5M EDTA(pH8.0) 2.0ml 20% glucose 4.5ml H2O total 100ml 【アルカリSDS溶液】 NaOH(1粒) 0.1g SDS 0.1g H2O total 10ml ※作るときはファルコンチューブを2本用意し、片方にはNaOHとH2O 1ml もう片方にはSDSとH2O 9mlを入れ使う前に混合する。
大事なことはSDSを入れてから中和するまで。この間に激しい操作を行なったり、温度を上げたりしないこと。そうすればOk。







