1.下の組成にしたがって培地を作成する。
ビーカーで作って構わない。水道水でOk.
2.pH7.0~7.4の間になるようにNaOHとHClを使い調整する。
スターターでかき混ぜながら電子式pH計を突っ込むと楽。
3.細菌培地用Agar(試薬のAgarよりも純度と目が粗い)を1.5%加える。
黄色の容器に入ってる。白いのはDNA用で値段が高い。
4.120℃、20分間オートクレーブにかける。
ビーカーからフラスコとか蓋があるビンとかに容器を変える。
ハンドルを完全に閉めてから少し開ける。だいたい1時間半で取り出せる。
5.手で持てるぐらいの温度(55℃?)まで下がったら抗生物質を用途に応じ添加。
濃度はAmpで50μg/μl。Cmで25μg/μl程度。
6.クリーンベンチでプレートに流し込む。
水蒸気がたまるので固まるまでは蓋を閉じない。固まったら逆さまにする。
90mmプレートで25ml/枚ぐらい。
7.固まったら冷蔵庫で保管。
作った日付、培地組成、抗生物質の有無、名前などを記入する。
液体培養では一般的にPlasmidを回収したい場合はLB培地、単に菌を増やしたいときはYTやTerrificを使うらしい。
プレートだったらLBかYT培地で作っておけばいい。
冷凍庫の中に×10の培養液が凍らして入っている。この培養液を湯せんで溶かし、10倍に希釈して利用すると楽。Terrific用の各溶液も無菌室に用意してある。
Agarは1.5%なので培養液1000mlに対し15g加えればいい。
抗生物質は×1000の溶液が冷蔵庫に入っている。これを培地1000mlに対して1ml加えればいい。抗生物質を取り扱うときは熱がかからないように氷中に置く。また使用後はすぐに戻す。
ビーカーで作って構わない。水道水でOk.
2.pH7.0~7.4の間になるようにNaOHとHClを使い調整する。
スターターでかき混ぜながら電子式pH計を突っ込むと楽。
3.細菌培地用Agar(試薬のAgarよりも純度と目が粗い)を1.5%加える。
黄色の容器に入ってる。白いのはDNA用で値段が高い。
4.120℃、20分間オートクレーブにかける。
ビーカーからフラスコとか蓋があるビンとかに容器を変える。
ハンドルを完全に閉めてから少し開ける。だいたい1時間半で取り出せる。
5.手で持てるぐらいの温度(55℃?)まで下がったら抗生物質を用途に応じ添加。
濃度はAmpで50μg/μl。Cmで25μg/μl程度。
6.クリーンベンチでプレートに流し込む。
水蒸気がたまるので固まるまでは蓋を閉じない。固まったら逆さまにする。
90mmプレートで25ml/枚ぐらい。
7.固まったら冷蔵庫で保管。
作った日付、培地組成、抗生物質の有無、名前などを記入する。
【YT培地】 酵母エキス 5.0g polypepton 8.0g NaCl 2.5g H2O total 1000ml (NaOHでpH7.2-7.4に調整) 【L培地】 酵母エキス 5.0g polypepton 10g NaCl 5.0g H2O total 1000ml (NaOHでpH7.2-7.4に調整) 【Terrific培地】 ・A液 酵母エキス(Difco) 24g polypepton(Difco) 10g glycerol 4.0ml H2O total 900ml ・B液 KH2PO4 23.0g K2HPO4 125.4g H2O total 100ml ※A液とB液両方ともオートクレーブしてから混合、計1000mlにする。 ※両液を分けてオートクレーブしないと塩が析出する。
液体培養では一般的にPlasmidを回収したい場合はLB培地、単に菌を増やしたいときはYTやTerrificを使うらしい。
プレートだったらLBかYT培地で作っておけばいい。
冷凍庫の中に×10の培養液が凍らして入っている。この培養液を湯せんで溶かし、10倍に希釈して利用すると楽。Terrific用の各溶液も無菌室に用意してある。
Agarは1.5%なので培養液1000mlに対し15g加えればいい。
抗生物質は×1000の溶液が冷蔵庫に入っている。これを培地1000mlに対して1ml加えればいい。抗生物質を取り扱うときは熱がかからないように氷中に置く。また使用後はすぐに戻す。







