１．ハイアパ（Hydroxyl apatite）カラムをA液で平衡化
２．サンプルをアプライ
サンプルがTrisなどのバッファーに入っていた場合は外液をA液として透析
３．A液でウォッシュ
４．A液からB液への勾配で溶出
ここではKPiの勾配だが、同時にNaClも～1Mで勾配をつけるとピークがきれいに分かれることもある
５．B液で押し出し
ハイアパは色々な相互作用によって吸着するらしく、原理的には何のカラムなのかはっきりしていない。アフィニティカラムだと言われることもある。
２．サンプルをアプライ
サンプルがTrisなどのバッファーに入っていた場合は外液をA液として透析
３．A液でウォッシュ
４．A液からB液への勾配で溶出
ここではKPiの勾配だが、同時にNaClも～1Mで勾配をつけるとピークがきれいに分かれることもある
５．B液で押し出し
【A液】 5mM KPi Buffer(pH7.5) 1mM DTT 100mM NaCl 10% glycerol H2O KPi Buffer 5ml glycerol 100g NaCl 5.84g DTT 154mg H2O total 1000ml 【B液】 600mM KPi Buffer(pH7.5) 1mM DTT 100mM NaCl 10% glycerol H2O KPi Buffer 600ml glycerol 100g NaCl 5.84g DTT 154mg H2O total 1000ml
ハイアパは色々な相互作用によって吸着するらしく、原理的には何のカラムなのかはっきりしていない。アフィニティカラムだと言われることもある。